Détermination de l’anti-SRAS-CoV-2 humain Protéine de nucléocapside

UTILISATION PRÉVUE

Le kit SARS-CoV-2 NP IgM ELISA est un test d’immunosorbant lié à une enzyme (ELISA) pour la détection et la mesure qualitative des anticorps de classe IgM contre la protéine de nucléocapside (NP) du virus SARS-CoV-2 dans le sang humain. Ce produit est destiné à être utilisé uniquement par des professionnels.

 

RÉSUMÉ

En décembre 2019, un nouveau coronavirus, désormais officiellement nommé coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SARS-CoV-2), a été identifié à Wuhan en Chine, ce qui a provoqué l’épidémie d’une maladie respiratoire aiguë associée au coronavirus appelée coronavirus 19 ( COVID-19), Les signes et symptômes du COVID-19 peuvent survenir 2 à 14 jours après l’infection, notamment fièvre, toux, essoufflement ou difficultés respiratoires, douleurs musculaires et fatigue. Dans les cas graves, l’infection peut entraîner une pneumonie, un syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS), une insuffisance rénale et la mort.

La protéine de nucléocapside (NP) est la protéine la plus abondante sur la nucléocapside hélicoïdale des coronavirus, qui enveloppe tout l’ARN génomique. Le NP interagit également avec d’autres protéines structurales virales pour jouer des rôles importants lors de l’entrée dans la cellule hôte et de l’assemblage et de la libération des particules virales. Il a été démontré que les anticorps anti-NP sont les anticorps les plus précoces et les plus prédominants détectables dans les échantillons sanguins de patients après une infection à coronavirus.

PRINCIPE DU TEST

Le kit ELISA d’ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 NP IgM est un kit d’immunoessai d’incubation en deux étapes. La protéine de nucléocapside recombinante (NP) du SRAS-CoV-2 pré-enduite sur les bandes de micropuits en polystyrène peut reconnaître spécifiquement les anticorps anti-NP dans le sérum humain ou les échantillons de plasma.

Après une incubation d’une heure, les anticorps anti-NP sont capturés par la protéine NP immobilisée tandis que les composants non liés sont éliminés par lavage.

Ensuite, une solution de détection contenant de l’IgM anti-humaine conjuguée à la HRP est ajoutée pour une autre incubation d’une heure, dans laquelle l’IgM anti-humaine conjuguée à la HRP se lie aux anticorps de classe IgM précédemment liés à la protéine NP sur la plaque.

Après élimination des liaisons non spécifiques, une solution de substrat HRP contenant de la 3,3 ‘, 5,5’-tétraméthylbenzidine (TMB) est ajoutée, conduisant à la formation d’une couleur bleue.

Gentaur.fr
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La réaction colorée est arrêtée par 2M H 2 ALORS 4, transformer la couleur bleue en signaux jaunes, qui est quantifiée par un lecteur de microplaques à absorbance à 450 nm. L’intensité de la couleur est proportionnelle à la quantité d’anticorps IgM anti-NP capturés à l’intérieur des puits.

 

UNE SRAS-CoV-2 NP

plaque ELISA revêtue

12 bandes de 8 puits (96 puits au total) dans un support de bande blanche et scellées dans un sachet en aluminium avec un dessicant. Chaque puits contient du NP recombinant

de SRAS-CoV-2. le les bandes de micropuits peuvent être utilisées séparément. Placer des puits inutilisés ou

bandes dans le sac de rangement en plastique scellable fourni avec le déshydratant et retourner à 2-8 ° C. Une fois ouvert, stable pendant 4 semaines à 2-8 ° C.
B Tampon de test 5x 1 x 20 ml
C Tampon de lavage 10x 1 x 40 ml
Détection 100x 1 x 0,12 ml
Solution d’anticorps
E Solution de substrat 1 x 12 ml
F Solution d’arrêt 1 x 12 ml
g Contrôle du blanc 1 x 1 ml
H Contrôle positif 1 flacon
(IgM anti-NP)

 

MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI

 

    • Pipettes et pointes de pipettes.

 

    • Plaque à 96 puits ou laveur manuel de bandes.

 

    • Réservoirs de tampon et de réactif.

 

    • Serviettes en papier ou papier absorbant.

 

    • Un lecteur de microplaques capable de lire l’absorbance à 450 nm.

 

    • Eau distillée ou eau désionisée.

STOCKAGE ET PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS DE TEST

 

      • Il est suggéré de doser les échantillons d’essai immédiatement après la séparation du sérum ou du plasma, ou de préférence de les conserver congelés (-20 0 C ou moins) en aliquotes. Les cycles multiples de gel-dégel doivent être évités. Un test en double est recommandé.

 

      • Des échantillons de sérum ou de plasma contenant de l’EDTA, du citrate de sodium ou de l’héparine peuvent être testés.

 

      • Les prélèvements hautement lipémiques, ictériques ou hémolytiques ne sont pas recommandés. Les échantillons présentant une contamination microbienne visible ne doivent pas être utilisés.

     

Gentaur
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      • Si nécessaire, testez au vortex des échantillons de sérum ou de plasma à température ambiante pour assurer l’homogénéité.

 

      • Puis centrifuger les échantillons à 10 000 à 15 000 tr / min pendant 5 minutes avant le dosage pour éliminer les particules.

 

      • Veuillez ne pas omettre cette étape de centrifugation si les échantillons sont troubles et contiennent des particules.

 

STOCKAGE ET STABILITÉ

      • Le kit est stable jusqu’à la date de péremption uniquement lorsqu’il est conservé à 2-8 ° C dans des sachets en aluminium scellés. La date de péremption est le dernier jour du mois indiqué sur la pochette en aluminium et le contenant du kit.

 

      • Le kit doit être conservé entre 2 et 8 ° C dès sa réception et tous les réactifs doivent être équilibrés à température ambiante avant utilisation.

 

      • Retirez toutes les bandes revêtues d’antigène inutilisées de la microplaque, remettez-les dans le sachet en aluminium et refermez-les.

 

      • Une fois ouvertes, les bandelettes peuvent être conservées entre 2 et 8 ° C pendant un mois maximum.

 

      • Pour garantir des performances maximales, protégez les réactifs de la contamination par des micro-organismes ou des produits chimiques pendant le stockage.

 

      • Conservez le contrôle positif à 4 degrés, jusqu’à 3 mois.