Immuno Diagnostics SARS-CoV-2 NP IgM ELISA

PRÉPARATION DES RÉACTIFS FOURNIS

  1. 1 × tampon de test. Préparer 1x tampon de test en mélangeant le tampon de test 5x (20 ml) avec 80 ml d’eau distillée ou d’eau désionisée. 【 MISE EN GARDE!!! 】 Siles précipités sont observés dans le flacon de tampon de dosage 5x, chauffer le flacon dans un bain-marie à 37 ° C jusqu’à ce que les précipités disparaissent. Une dissolution incomplète entraînera un bruit de fond élevé. Le test 1x Le tampon peut être conservé entre 2 et 8 ° C pendant un mois maximum.

  1. tampon 1xWash Préparez le tampon 1xWash en mélangeant le tampon 10xWash (40 ml) avec 360 ml d’eau distillée ou d’eau désionisée. MISE EN GARDE!!! Siles précipités sont observés dans le flacon de tampon 10xWash, réchauffer le flacon dans un lot d’eau à 37 ° C jusqu’à ce que les précipités disparaissent. Une dissolution incomplète entraînera un bruit de fond élevé. Le 1xWash Le tampon peut être conservé entre 2 et 8 ° C pendant un mois maximum.

  1. 1x solution d’anticorps de détection Faites tourner brièvement la solution d’anticorps de détection 100 × et diluez la quantité souhaitée d’anticorps au 1: 100 avec 1 × tampon de test, 100 m 1 de la solution d’anticorps de détection 1 × est nécessaire par puits.Préparez uniquement comme beaucoup 1 × solution d’anticorps de détection au besoin.   Retourner le 100 × solution d’anticorps de détection à 2-8 ° C immédiatement après le retrait du volume nécessaire.

 

  1. Préparation du contrôle positif Centrifuger brièvement avant d’ouvrir le tube. Ajouter 200 µl de tampon 1xAssay dans chaque tube et bien mélanger.
gentaur
gentaur

 

LA PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS

Un échantillon de sérum ou de plasma est généralement nécessaire une dilution de 100 fois dans le tampon de test 1 ×. Une étape de dilution suggérée consiste à ajouter 10 µl d’échantillon à 990 µl de tampon de test 1 ×.

PROCÉDURES DE DOSAGE

Veuillez équilibrer tous les réactifs à température ambiante (20-25 ° C) pendant au moins 30 minutes avant utilisation.

 

Ajout de contrôles et d’échantillon:
Ajouter 100 μl d’échantillon, 100 μl de contrôle à blanc et 100 μl de
contrôle positif dans leurs puits respectifs. Un test en double est
Étape 1 recommandé.
Remarque: utilisez une pointe de pipette d’élimination distincte pour chaque test
afin d’éviter toute contamination croisée. Mélangez en tapotant doucement la
plaque.
Incubation:
Étape 2 Couvrir la plaque et incuber à température ambiante pendant 1 heure.
La lessive:
Jeter le contenu et tapoter la plaque sur une serviette en papier propre pour
Étape 3 éliminer la solution résiduelle dans chaque puits. Ajouter 300 µl de tampon de
lavage 1 × dans chaque puits et incuber pendant 1 minute. Jetez le tampon de
lavage 1 × et appuyez sur le
plaque sur une serviette en papier propre pour éliminer le tampon de lavage
résiduel. Répétez l’étape de lavage pour un total de 3 lavages.
Étape 4 Ajout d’une solution de détection conjuguée à la HRP:
Ajouter 100 µl de solution de détection 1 × dans chaque puits.
Incubation:
Étape 5 Couvrir la plaque et incuber à température ambiante pendant 1 heure.
Étape 6 La lessive:
Lavez chaque puits 4 fois comme décrit à l’étape 3.
Coloration:
Étape 7 Ajouter 100 µl de solution de substrat dans chaque puits, incuber à
température ambiante pendant 15 minutes.
Protéger de la lumière.
Arrêt de la réaction:
Étape 8 Ajouter 100 µl de solution d’arrêt à chaque puits, tapoter doucement le cadre de
la plaque pendant quelques secondes pour assurer un mélange complet.

CONTRÔLE DE QUALITÉ

Chaque microplaque doit être considérée séparément lors du calcul et de l’interprétation des résultats du test, quel que soit le nombre de plaques traitées simultanément.

gentaur
gentaur

Les résultats des tests sont valides si les critères de contrôle qualité sont remplis. Il est recommandé que chaque laboratoire établisse un système de contrôle de qualité approprié avec un matériel de contrôle de qualité similaire ou identique à l’échantillon de patient analysé.

    • La valeur d’absorbance du contrôle à blanc doit être <0,170 à 450 nm.

 

    • La valeur d’absorbance du contrôle positif doit être> 0,500 à 450 nm.

 

 

Échantillons OD450
0,113
Contrôle négatif 0,098
Contrôle positif 0,531
0,568
Sérum de sujets sains 0,154
Sérum de COVID-19 1,052
0,38
les patients
0,242

CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE

Le taux de détection 60% (n = 80)
Spécificité 92% (n = 100)
Précision inter-test
Échantillons CV
1 7,16%
2 5,35%
3 6,19%
Précision intra-test
Échantillons CV
1 4,93%
2 6,77%
3 5,89%
    • Une étude de validation clinique d’ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 NP IgM ELISA a été menée en 2020 à Shenzhen, en Chine. Des échantillons ont été collectés à partir de cas confirmés COVID-19 avec des symptômes cliniques, des anomalies de laboratoire ou des manifestations d’imagerie pulmonaire. Aucun test n’a été réalisé sur des échantillons d’infections latentes ou de patients en période d’incubation.

 

    • Le kit a montré un taux de détection positif plus élevé dans les échantillons provenant de patients avec un début retardé. Par conséquent, l’interprétation des résultats du test doit tenir compte du temps de prélèvement de l’échantillon.

 

    • Le taux de détection des NP IgM est d’environ 60%. Une raison peut être le moment de la collecte des échantillons, car tous les échantillons de sang ont été prélevés chez les patients au moins 1 semaine après le diagnostic clinique et l’IGM se produit principalement au stade précoce de l’infection.

 

    • Il est fortement recommandé que chaque laboratoire établisse sa propre plage de référence normale et pathologique pour le niveau d’IgM anti-NP. En outre, il est également recommandé que chaque laboratoire inclue son propre panel d’échantillons de contrôle dans le test.

 

PRÉCAUTIONS ET SÉCURITÉ

Les dosages ELISA sont sensibles au temps et à la température. Pour éviter un résultat incorrect, suivez strictement les étapes de la procédure de test et ne les modifiez pas.

    1. N’échangez pas de réactifs provenant de lots différents et n’utilisez pas de réactifs provenant d’autres kits disponibles dans le commerce. Les composants du kit sont précisément adaptés pour une performance optimale des tests.

 

    1. Assurez-vous que tous les réactifs sont dans la validité indiquée sur la boîte du kit et du même lot. N’utilisez jamais de réactifs au-delà de leur date de péremption indiquée sur les étiquettes ou les boîtes.

 

    1. ATTENTION – ÉTAPE CRITIQUE: Laisser les réactifs et les échantillons atteindre la température ambiante (20-25 ° C) avant utilisation. Agitez doucement le réactif avant utilisation. Renvoyer à 2-8 ° C immédiatement après utilisation.

 

    1. Utilisez uniquement un volume d’échantillon suffisant comme indiqué dans les étapes de la procédure. Le non-respect de cette consigne peut entraîner une faible sensibilité du test.

 

    1. Ne touchez pas le fond extérieur des puits; les empreintes digitales ou les rayures peuvent interférer avec la lecture. Lors de la lecture des résultats, assurez-vous que le fond de la plaque est sec et qu’il n’y a pas de bulles d’air à l’intérieur des puits.

 

  1. Ne laissez jamais les puits de la microplaque sécher après l’étape de lavage. Passez immédiatement à l’étape suivante. Évitez la formation de bulles d’air lors de l’ajout des réactifs.
      1. Évitez les interruptions prolongées des étapes du test. Assurer les mêmes conditions de travail pour tous les puits.

     

      1. Calibrez fréquemment la pipette pour garantir l’exactitude de la distribution des échantillons / réactifs. Utilisez des pointes de pipette d’élimination différentes pour chaque échantillon et réactif afin d’éviter les contaminations croisées.

     

      1. Lors de l’ajout d’échantillons, ne touchez pas le fond du puits avec la pointe de la pipette.

     

      1. Lors de la mesure avec un lecteur de plaque, déterminez l’absorbance à 450 nm.

     

      1. L’activité enzymatique du conjugué HRP peut être affectée par la poussière et les produits chimiques réactifs et des substances telles que l’hypochlorite de sodium, les acides, les alcalis, etc. N’effectuez pas le test en présence de ces substances.

     

      1. Tous les échantillons d’origine humaine doivent être considérés comme potentiellement infectieux. Le strict respect des réglementations BPL (bonnes pratiques de laboratoire) peut garantir la sécurité personnelle.

     

      1. Ne jamais manger, boire, fumer ou appliquer des produits cosmétiques dans le laboratoire d’analyse. Ne jamais pipeter les solutions à la bouche.

     

      1. Les produits chimiques doivent être manipulés et éliminés uniquement conformément aux BPL (bonnes pratiques de laboratoire) en vigueur et aux réglementations locales ou nationales.

     

      1. Les pointes de pipette, les flacons, les bandelettes et les récipients d’échantillons doivent être collectés et autoclavés pendant au moins 2 heures à 121 ° C ou traités avec de l’hypochlorite de sodium à 10% pendant 30 minutes pour décontaminer avant toute autre étape d’élimination. Les solutions contenant de l’hypochlorite de sodium ne doivent JAMAIS être autoclavées. Fiche de données de sécurité (MSDS) disponible sur demande.

     

      1. Certains réactifs peuvent provoquer une toxicité, une irritation, des brûlures ou avoir un effet cancérigène en tant que matières premières. Le contact avec la peau et les muqueuses doit être évité, mais sans s’y limiter, les réactifs suivants: la solution d’arrêt, la solution de substrat et le tampon de lavage.

     

      1. La solution d’arrêt 2MH 2 ALORS 4 est un acide. Utilisez-le avec soin. Essuyez immédiatement les éclaboussures et laver avec de l’eau en cas de contact avec la peau ou les yeux.

     

      1. ProClinTM300 0,1% utilisé comme conservateur, peut provoquer une sensation cutanée. Essuyez immédiatement les éclaboussures ou rincez à l’eau en cas de contact avec la peau ou les yeux.

     

gentaur
gentaur

RÉSUMÉ DE LA PROCÉDURE DE DOSAGE

    • Ajouter 100 μl d’échantillon dans chaque puits.

 

    • Incuber à température ambiante pendant 1 heure.

 

    • Aspirez et lavez chaque bien trois fois.

 

    • Ajouter 100 μl de 1 × solution d’anticorps de détection dans chaque puits.

 

    • Incuber à température ambiante pendant 1 heure.

 

    • Aspirez et lavez chaque bien quatre fois.

 

    • Ajouter 100 μl de solution de substrat dans chaque puits.

 

    • Incuber à température ambiante pendant 15 minutes.

 

    • Ajouter 100 μl de solution d’arrêt dans chaque puits.

 

    • Mesurer l’absorbance de chaque puits à 450 nm.

 

    • Calcul et interprétation