Protéine SARSCoV-2 Spike S1 dans le sérum, le plasma

CONTEXTE

Le SRAS-CoV-2 est un virus enveloppé avec un génome ARN de sens positif et une nucléocapside à symétrie hélicoïdale. L’entrée du SRAS-CoV-2 dans les cellules hôtes est médiée par le pic transmembranaire

  • glycoprotéine, qui est la cible principale des anticorps neutralisants lors de l’infection et au centre de la conception thérapeutique et du vaccin.
  • S comprend deux sous-unités fonctionnelles responsables de la liaison au récepteur de la cellule hôte (sous-unité S1) et de la fusion des membranes virale et cellulaire (sous-unité S2).
  • La sous-unité distale S1 comprend le (s) domaine (s) de liaison au récepteur et contribue à la stabilisation de l’état de préfusion de la sous-unité S2 ancrée dans la membrane qui contient la machinerie de fusion.

 

UTILISATION PRÉVUE

Le kit SARS-CoV-2 S1 protein IgG ELISA est un test immunologique hautement sensible et spécifique développé par ImmunoDiagnostics pour la détection de précision et la mesure quantitative des anticorps de classe IgG contre la protéine S1 du virus SARS-CoV-2 dans des échantillons de sang humain in vitro.

Ce produit est destiné à être utilisé uniquement par des professionnels. Ce produit est destiné à un usage de recherche uniquement.

 

PRINCIPE DU TEST

Les plaques à 96 puits sont recouvertes de protéine SARS-CoV-2 S1 qui capture les anticorps IgG contre la protéine SARS-CoV-2 S1 dans l’échantillon. Après avoir éliminé les matériaux non liés, capturé les IgG contre le SRAS-CoV-2

La protéine S1 est détectée par des anticorps polyclonaux anti-IgG humains conjugués à la peroxydase de raifort (HRP). Après l’étape de lavage, le substrat chromogène 3,3 ‘, 5,5’-tétraméthylbenzidine (TMB) est ajouté. La réaction colorée est arrêtée par 2M H2SO4.

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La quantité d’anticorps anti-SRAS-CoV-2 S1 capturés à l’intérieur des puits est proportionnelle à la densité de couleur générée dans la réaction d’oxydo-réduction couplée. La concentration inconnue de l’échantillon peut être interpolée à partir d’une courbe standard générée par un anticorps monoclonal anti-S1 humain (mAb).

RÉACTIFS FOURNIS

Chaque kit est suffisant pour 96 tests et contient les composants suivants:

  1. Un sachet en aluminium avec une plaque de micropuits (12 bandes de 8 puits chacune) enduit de protéine SARS-CoV-2 S1, scellée. Les bandes de micropuits peuvent être utilisées séparément.

 

  1. Tampon de lavage 10 × 40 ml.

 

  1. 5 x tampon de dosage – 20 ml.

 

  1. 100 × solution d’anticorps de détection: IgG anti-humaine conjuguée à HRP, 0,12 ml.

 

  1. 10 × Standard: mA anti-S1 humanisé – 50 μL.

 

  1. Solution de substrat, 12 ml, prête à l’emploi.

 

  1. Solution d’arrêt, 12 ml, prête à l’emploi.
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AUTRES MATÉRIAUX REQUIS, MAIS NON FOURNIS

 

  1. Pipettes et pointes de pipette.

 

  1. Béchers, flacons, cylindres nécessaires à la préparation des réactifs.

 

  1. Réservoirs de tampon et de réactif.

 

  1. Serviettes en papier ou papier absorbant.

 

  1. Lecteur de plaque capable de lire l’absorbance à 450 nm.

 

  1. Eau distillée ou eau désionisée.

 

  1. Calculatrice statistique avec programme pour effectuer une analyse de régression.

 

ESPACE DE RANGEMENT

 

  • Le kit doit être conservé entre 2 et 8 ° C et tous les réactifs doivent être équilibrés à température ambiante avant utilisation.
  • Immédiatement après l’utilisation, les réactifs restants doivent être remis dans une chambre froide (2-8 ° C).

 

  • La date d’expiration du kit et des réactifs est indiquée sur les étiquettes.

 

  • Une fois ouvertes, les bandelettes peuvent être conservées entre 2 et 8 ° C pendant un mois maximum.

 

INSTRUCTIONS DE COLLECTE ET DE STOCKAGE DES ÉCHANTILLONS

Manipulez l’échantillon de sérum ou de plasma conformément aux directives du Comité national des normes de laboratoire clinique pour prévenir la transmission de l’infection par le sang.

 

  • N’utilisez pas d’échantillons fortement hémolysés ou lipémiques.

 

  • Sérum humain: utilisez un tube séparateur de sang et laissez l’échantillon coaguler pendant 30 minutes, puis centrifuger pendant 10 minutes à 1000 g. Lorsque le sérum humain est testé, il doit être dilué au moins 100 fois.

 

  • Plasma humain: traiter le sang avec un anticoagulant tel que le citrate, l’EDTA ou l’héparine. Centrifuger pendant 10 minutes à 1000 g dans les 30 minutes pour la collecte de plasma. Lorsque le plasma humain est testé, il doit être dilué au moins 100 fois.

 

  • Les échantillons ne peuvent pas être testés immédiatement doivent être aliquotés et doivent être conservés congelés à une température inférieure à – 20 ° C.
  • Évitez les cycles de congélation-décongélation répétés.

 

  • Effectuer une expérience préliminaire pour déterminer la dilution optimale de l’échantillon de détection.
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PRÉCAUTIONS D’EMPLOI

 

  • Tous les produits chimiques doivent être considérés comme potentiellement dangereux. Eviter le contact avec la peau et les yeux. En cas de contact avec la peau ou les yeux, laver à l’eau.

 

  • N’utilisez pas les réactifs du kit au-delà de la date de péremption.

 

  • N’exposez pas les réactifs du kit à une forte lumière. Ne pas pipeter à

 

  • la bouche.

 

  • Ne pas manger ni fumer dans la zone où les réactifs ou les échantillons du kit sont manipulés.

 

  • Utilisez uniquement un volume d’échantillon suffisant comme indiqué dans les étapes de la procédure. Le non-respect de cette consigne peut entraîner une faible sensibilité du test.

 

 

  • Évitez le contact de la solution de substrat avec des agents oxydants et du métal.

 

  • Utilisez des pointes et / ou des pipettes jetables.

 

  • Utilisez des plateaux de réactifs propres et dédiés pour distribuer le conjugué et le réactif de substrat.

 

  • Ne touchez pas le fond extérieur des puits; les empreintes digitales ou les rayures peuvent interférer avec la lecture. Lors de la lecture des résultats, assurez-vous que le fond de la plaque est sec et qu’il n’y a pas de bulles d’air à l’intérieur des puits.

 

  • L’activité enzymatique du conjugué HRP peut être affectée par la poussière et les produits chimiques réactifs et des substances telles que l’hypochlorite de sodium, les acides, les alcalis, etc. N’effectuez pas le test en présence de ces substances.

 

  • La solution de substrat doit être à température ambiante avant utilisation.