Reconnaître l’Anti-S1RBD dans le sérum humain

PRÉCAUTIONS D’EMPLOI

 

  • Tous les produits chimiques doivent être considérés comme potentiellement dangereux. Eviter le contact avec la peau et les yeux. En cas de contact avec la peau ou les yeux, laver à l’eau.

 

  • N’utilisez pas les réactifs du kit au-delà de la date de péremption.

 

  • N’exposez pas les réactifs du kit à une forte lumière. Ne pas pipeter à

 

  • la bouche.

 

  • Ne pas manger ni fumer dans la zone où les réactifs ou les échantillons du kit sont manipulés.

 

  • Utilisez uniquement un volume d’échantillon suffisant comme indiqué dans les étapes de la procédure. Le non-respect de cette consigne peut entraîner une faible sensibilité du test.
    • Évitez le contact de la solution de substrat avec des agents oxydants et du métal.

     

    • Utilisez des plateaux de réactifs propres et dédiés pour distribuer le conjugué et le réactif de substrat.

     

    • Ne touchez pas le fond extérieur des puits; les empreintes digitales ou les rayures peuvent interférer avec la lecture. Lors de la lecture des résultats, assurez-vous que le fond de la plaque est sec et qu’il n’y a pas de bulles d’air à l’intérieur des puits.

     

    gentaur
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    • L’activité enzymatique du conjugué HRP peut être affectée par la poussière et les produits chimiques réactifs et des substances telles que l’hypochlorite de sodium, les acides, les alcalis, etc. N’effectuez pas le test en présence de ces substances.

     

    • La solution de substrat doit être à température ambiante avant utilisation.

     

    Utilisez des pointes et / ou des pipettes jetables.

 

PRÉPARATION DES RÉACTIFS

 

 

Amenez tous les réactifs et matériaux à température ambiante avant utilisation 1. 1 × tampon de lavage. Préparer 1 × tampon de lavage en mélangeant le tampon de lavage 10 × (40 ml) avec 360 ml d’eau distillée ou d’eau désionisée. 【 MISE EN GARDE!!! 】 Si

les précipités sont observés dans le flacon de tampon 10xWash, réchauffer le flacon dans un lot

 

d’eau à 37 ° C jusqu’à ce que les précipités disparaissent. Une dissolution incomplète entraînera un bruit de fond élevé. Le 1 × Wash

 

Le tampon peut être conservé entre 2 et 8 ° C pendant un mois maximum.

 

  1. 1 × tampon de test.Préparer 1x tampon de test en mélangeant le tampon de test 5x (20 ml) avec 80 ml d’eau distilléeou d’eau désionisée. 【 MISE EN GARDE!!! 】 Siles précipités sont observés dans le flacon de tampon de dosage 5x, chauffer le flacon dans un bain-marie à 37 ° C jusqu’à ce que les précipités disparaissent. Une dissolution incomplète entraînera un bruit de fond élevé. Le test 1x Le tampon peut être conservé entre 2 et 8 ° C pendant un mois maximum.

 

  1. 1 × solution d’anticorps de détection.
    Faites tourner brièvement la solution d’anticorps de détection 100 × et diluez la quantité souhaitée de l’anticorps 1: 100 avec un tampon de test 1 ×, 100 μL de solution d’anticorps de détection 1 × sont nécessaires par puits. Préparez seulement autant de solution d’anticorps de détection 1 × que nécessaire. Remettre la solution d’anticorps de détection 100 × à 2-8 ° C immédiatement après avoir pipeté le volume nécessaire.
gentaur
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PRÉPARATION DU STANDARD ET DES ÉCHANTILLONS

Préparation standard:

 

Centrifuger brièvement le tube standard avant d’ouvrir le capuchon. Ajouter 540 μL de tampon de test 1 × dans le standard Anti-S1RBD mAb 10 × (60 μL) pour générer le premier standard (10 ng / ml). Préparez les standards dilués en série en utilisant 1 × tampon de test comme suit:

 

Volume standard Volume de 1 × tampon de dosage
Concentratio n
1 10 ng / ml 10 ng / ml
2 300 µL de 10 ng / ml 300 300 µL 5 ng / ml
3 µL de 5 ng / ml 300 µL de 300 µL 2,5 ng / ml
4 2,5 ng / ml 300 µL de 1,25 300 µL 1,25 ng / ml
5 ng / ml 300 µL 0,625 ng / ml

 

 

1x tampon de test sert de blanc (0 ng / ml).

 

Remarque: Le stock standard reconstitué doit être aliquoté et conservé entre 2 et 8 ℃ pendant un

 

mois maximum.

 

La préparation des échantillons:

Un échantillon de sérum ou de plasma est généralement requis Dilution 100 fois dans le tampon de test 1X. Une étape de dilution suggérée consiste à ajouter 2 μL d’échantillon à 198 μL de tampon de test 1X. Le facteur de dilution peut être ajusté en fonction du titre des anticorps dans les échantillons.

PROCÉDURE DE DOSAGE

 

Il est recommandé que tous les standards et échantillons soient analysés en double.

 

  1. Ajouter 100 µl d’étalons ou d’échantillons par puits et incuber à température ambiante pendant 1 heure, sous agitation à 600 tr / min. (Remarque: l’incubation sans secousse diminue proportionnellement le signal d’environ 30%. Si aucun agitateur n’est disponible, prolongez le temps d’incubation à 2 heures).

 

  1. Jeter le contenu et tapoter la plaque sur une serviette en papier propre pour éliminer la solution résiduelle dans chaque puits. Ajouter 300 µl de tampon de lavage 1 × dans chaque puits et incuber pendant 1 minute. Jeter le tampon de lavage 1 × et tapoter la plaque sur une serviette en papier propre pour éliminer le tampon de lavage résiduel. Répétez l’étape de lavage 4 fois au total.

 

  1. Ajouter 100 µl de solution d’anticorps de détection 1 × dans chaque puits, incuber à température ambiante pendant 1 heure.

 

  1. Lavez chaque puits 4 fois comme décrit à l’étape 2.

 

  1. Ajouter 100 µl de solution de substrat dans chaque puits, incuber à température ambiante pendant 15 minutes. Protéger de la lumière.

 

  1. Ajouter 100 µl de solution d’arrêt à chaque puits, tapoter doucement le cadre de la plaque pendant quelques secondes pour assurer un mélange complet.

 

  1. Déterminez immédiatement la densité optique de chaque puits à 450 nm.

 

CACULATION

 

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  1. Soustrayez l’absorbance du blanc de celle des standards et des échantillons.

 

  1. Générer une courbe standard en traçant l’absorbance obtenue (axe y) par rapport au mAb anti-S1RBD humanisé (axe des x). La meilleure ligne d’ajustement peut être générée avec n’importe quel logiciel d’ajustement de courbe par analyse de régression. Toute courbe d’ajustement de courbe à 4 paramètres ou log-log peut être utilisée pour le calcul.

 

  1. Déterminer la concentration en IgG anti-S1RBD humanisée des échantillons à partir de la courbe standard et multiplier la valeur par le facteur de dilution.

 

PRÉCISION

 

Intra-essai: Trois niveaux différents connus de contrôle positif ont été ajoutés dans le tampon d’échantillon en tant qu’échantillons de test. Tous les échantillons ont été testés sur la même plaque pour évaluer la précision intra-test du kit. La précision Intraassay de ce kit est inférieure à 5%.

 

Inter-analyse: Trois niveaux de contrôle connus différents ont été ajoutés au tampon d’échantillon en tant qu’échantillons de test. Tous les échantillons ont été testés dans 3 dosages séparés pour évaluer la précision intra-dosage du kit. La précision inter-analyse de ce kit est inférieure à 7%.

 

SENSIBILITÉ ET SPÉCIFICITÉ

 

Nous avons testé ce test dans des échantillons sanguins de 60 patients COVID-19 bien caractérisés et 58 patients sur 60 étaient IgG anti-SARS-CoV-2 S1RBD positifs. 100 échantillons de sang provenant d’individus en bonne santé ont été testés, et aucun d’entre eux n’était positif. La sensibilité de ce test est

 

≥ 96%, et la spécificité de ce test est ≥98%.

 

RÉSUMÉ DE LA PROCÉDURE DE DOSAGE

 

 

Ajouter 100 μl d’étalon / échantillon dans chaque puits.

Incuber à température ambiante pendant 1 heure sous agitation à 600 tr / min. (Si shaker

n’est pas disponible, prolongez le temps d’incubation à 2 heures.)

Aspirez et lavez chaque bien trois fois.

Ajouter 100 μl de 1 × solution d’anticorps de détection dans chaque puits.

Incuber à température ambiante pendant 1 heure.

Aspirez et lavez chaque bien quatre fois.

Ajouter 100 μl de solution de substrat dans chaque puits.

Incuber à température ambiante pendant 15 minutes.

Ajouter 100 μl de solution d’arrêt dans chaque puits.

 

Mesurer l’absorbance de chaque puits à 450 nm.

 

Calcul et interprétation