S1 Domaine de Liaison Au Récepteur Polypeptidique (S1RBD)

CONTEXTE

En décembre 2019, un nouveau coronavirus, désormais officiellement nommé coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SARS-CoV-2), a été identifié à Wuhan en Chine, qui a provoqué l’épidémie d’une maladie respiratoire aiguë associée au coronavirus appelée coronavirus maladie 19 (COVID- 19).

Les signes et symptômes du COVID-19 peuvent survenir 2 à 14 jours après l’infection, notamment fièvre, toux, essoufflement ou difficultés respiratoires, douleurs musculaires et fatigue. Dans les cas graves, l’infection peut entraîner une pneumonie, un syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS), une insuffisance rénale et la mort.

La protéine de pointe (S) est une protéine ancrée dans l’enveloppe qui intervient dans la reconnaissance et la liaison du SARS-CoV-2 aux cellules hôtes.

S peut être davantage clivé par la protéase hôte en deux sous-unités appelées S1 et S2. Le polypeptide S1 contient un domaine de liaison au récepteur (S1RBD) crucial pour la reconnaissance spécifique et l’interaction avec le récepteur humain ACE2, qui est la première et la plus essentielle étape de l’infection virale.

 

UTILISATION PRÉVUE

Le kit SARS-CoV-2 S1RBD IgG ELISA est un test immunologique hautement sensible et spécifique développé par ImmunoDiagnostics pour la détection de précision et la mesure quantitative des anticorps de classe IgG contre le S1RBD du virus SARS-CoV-2 dans des échantillons de sang humain.

Ce produit est destiné à être utilisé uniquement par des professionnels. Ce produit est

destiné à un usage de recherche uniquement.

PRINCIPE DU TEST

Le kit ImmunoDiagnostics SARS-CoV-2 S1RBD IgG ELISA est un kit d’immunoessai d’incubation en deux étapes. Le domaine de liaison au récepteur de la protéine de pointe S1 recombinante (S1RBD) de SARS-CoV-2 pré-enduit sur les bandes de micropuits en polystyrène peut reconnaître spécifiquement les anticorps anti-S1RBD dans le sérum humain ou l’échantillon de plasma.

 

gentaur
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Après une incubation d’une heure, les anticorps anti-S1RBD sont capturés par la protéine S1RBD immobilisée tandis que les composants non liés sont éliminés par lavage.

Ensuite, une solution de détection contenant de l’IgG anti-humaine conjuguée à la HRP est ajoutée pour une autre incubation d’une heure, dans laquelle l’IgG anti-humaine conjuguée à la HRP se lie aux anticorps de classe IgG précédemment liés à la protéine S1RBD sur la plaque. Après élimination des liaisons non spécifiques, une solution de substrat HRP contenant 3,3 ′, 5,5′-tétraméthylbenzidine (TMB) est ajoutée, résultant en

la formation d’une couleur bleue. La réaction colorée est arrêtée par 2M H 2 ALORS 4,transformer la couleur bleue en signaux jaunes, qui est quantifiée par un lecteur de microplaques à absorbance à 450 nm. L’intensité de la couleur est proportionnelle à la quantité d’anticorps anti-S1RBP capturés à l’intérieur des puits.

La concentration inconnue de l’échantillon peut être interpolée à partir d’une courbe standard générée par l’anticorps monoclonal (mAb) anti-S1RBD humanisé.

 

RÉACTIFS FOURNIS

 

12 bandes de 8 puits (96 puits au total) dans un
support de bande blanche et scellées dans un
sachet en aluminium avec un dessicant. Chaque
puits contient du S1RBD recombinant de
SARSCoV-2. Les bandes de micropuits peuvent
UNE SARS-CoV-2 S1RBD être utilisées séparément. Placer les puits ou les
plaque ELISA revêtue bandelettes inutilisés dans le sac de stockage
en plastique scellable fourni avec le dessiccant
et remettre à 2-8 ° C. Une fois ouvert, stable
pendant 4 semaines à 2-8 ° C.

 

B Tampon de test 5x 1 x 20 ml
C Tampon de lavage 10x 1 x 40 ml
Détection 100x 1 x 0,12 ml
Solution d’anticorps
E Solution de substrat 1 x 12 ml
F Solution d’arrêt 1 x 12 ml
10 × standard
g (Anti-humanisé 1 x 50 µl
Anticorps S1RBD)

 

AUTRES MATÉRIAUX REQUIS, MAIS NON FOURNIS

 

Gentaur.fr
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  1. Pipettes et pointes de pipette.

 

  1. Béchers, flacons, cylindres nécessaires à la préparation des réactifs.

 

  1. Réservoirs de tampon et de réactif.

 

  1. Serviettes en papier ou papier absorbant.

 

  1. Lecteur de plaque capable de lire l’absorbance à 450 nm.

 

  1. Eau distillée ou eau désionisée.

 

  1. Calculatrice statistique avec programme pour effectuer une analyse de régression.

ESPACE DE RANGEMENT

 

  • Le kit doit être conservé entre 2 et 8 ° C et tous les réactifs doivent être équilibrés à température ambiante avant utilisation. Immédiatement après l’utilisation, les réactifs restants doivent être remis dans une chambre froide (2-8 ° C).

 

  • La date d’expiration du kit et des réactifs est indiquée sur les étiquettes.

 

  • Une fois ouvertes, les bandelettes peuvent être conservées entre 2 et 8 ° C pendant un mois maximum.

INSTRUCTIONS DE COLLECTE ET DE STOCKAGE DES ÉCHANTILLONS

 

Manipulez l’échantillon de sérum ou de plasma conformément aux directives du Comité national des normes de laboratoire clinique pour prévenir la transmission de l’infection par le sang.

gentaur
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  • N’utilisez pas d’échantillons fortement hémolysés ou lipémiques.

 

  • Sérum humain: utilisez un tube séparateur de sang et laissez l’échantillon coaguler pendant 30 minutes, puis centrifuger pendant 10 minutes à 1000 g. Lorsque le sérum humain est testé, il doit être dilué au moins 100 fois.

 

  • Plasma humain: traiter le sang avec un anticoagulant tel que le citrate, l’EDTA ou l’héparine. Centrifuger pendant 10 minutes à 1000g en 30 minutes minutes pour la collecte de plasma. Lorsque le plasma humain est testé, il doit être dilué au moins 100 fois.

 

  • Les échantillons ne peuvent pas être testés immédiatement doivent être aliquotés et doivent être conservés congelés à une température inférieure à – 20 ° C. Évitez les cycles répétés de gel-dégel.

 

  • Effectuer une expérience préliminaire pour déterminer la dilution optimale de l’échantillon de détection.